产品名称：黄曲霉毒素总量免疫亲和柱
产品品牌：HPSW
产品货号：06990-2530
产品规格：3ml

【概要】
黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉 （aspergillus flavus）寄生曲霉 （a.parasiticus）产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质.黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B₁最为多见，其毒性和致癌性也最强。B₁是最危险的致癌物，经常在玉米，花生，棉花种子，一些干果中常能检测到。它们在紫外线照射下能产生荧光，根据荧光颜色不同，将其分为B族和G族两大类及其衍生物。AFT已发现20余种。AFT主要污染粮油食品、动植物食品等；如花生、玉米，大米、小麦、豆类、坚果类、肉类、乳及乳制品、水产品等均有黄曲霉毒素污染。世界各国对食品，饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。
【适用范围及性能】
    真菌毒素免疫柱系列产品测试形式是一个高性能的免疫亲和柱，设计用于在进行 HPLC（高效液相色谱法）、GC-MS（气相色谱-质谱联 用 仪）、ELISA（酶联免疫吸附剂测定）之前清理（净化）或 浓缩样本。
 
用于定性、定量检测谷物、副食品、酒类等食品和饲料等样本中的黄曲霉毒素总量（B₁,B₂,G₁,G₂）时的样品前处理。
总柱容量：≥200ng
回收率：≥90%
 
【试验原理】
本产品的测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素单克隆抗体连接在柱内凝胶上，样品中的黄曲霉毒素经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢的通过黄曲霉毒素免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内，毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。
【包装组成】
黄曲霉毒素总量标准品（选配）
25支/盒，3mL柱管/支
产品说明书1份
【需要而未提供的设备及试剂】
设备：
┅┅高速均质器或组织匀浆机
┅┅粉碎机
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天平：感量0.1g
┅┅微量移液器：单道 100ml～1000ml
┅┅槽纹滤纸（折叠快速定性或定量滤纸）
┅┅玻璃微纤维滤纸（1.5mm孔径）
┅┅50ml漏斗
┅┅一次性玻璃试管
┅┅泵流操作架（包括空气泵，不同容积的玻璃注射器等）
试剂：
┅┅甲醇（色谱级）
┅┅蒸馏水或去离子水
┅┅pH7.0磷酸盐缓冲溶液（PBS）：称取8.0g氯化钠，1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用纯水稀释至1000mL
┅┅吐温-20/PBS溶液（0.1%）：取1mL吐温-20，加入PBS缓冲溶液并定容至1000mL
【试剂配制】
样品提取液：根据不同的样品配置不同浓度的甲醇水溶液，作为样品提取液。
 
【样本处理步骤】
（一）花生，玉米，大米，小麦及其制品，植物油脂和饲料
┅┅取25g粉碎的样品（植物油脂直接取样，无需处理）与125mL甲醇-水（7：3）溶液混合或者使用125mL乙腈-水（84:16）提取；
┅┅加入5.0g氯化钠以均质器高速搅拌，提取2分钟；
┅┅4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤；
┅┅取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤
┅┅取稀释后液体待测；
┅┅取1支亲和柱，将20.0mL玻璃注射器前端戳进亲和柱上端帽子上，注射器即可与亲和柱连接。准确移取15.0mL样品提取液注入玻璃注射器；
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
┅┅以10.0mL水淋洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体；
┅┅确加入2.0mL色谱级甲醇或2mL色谱级乙腈洗脱，首先，将1ml洗脱溶剂加入免疫亲和柱上方，使洗脱溶剂在重力作用下流动。待洗脱溶剂通过免疫亲和柱后，盖好下帽，加入1mL洗脱溶剂，让洗脱溶剂在免疫亲和柱中保存30-60s，然后使剩余的洗脱溶剂通过免疫亲和柱，流速为1 mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，定容，供检测用。
 
（二）酱油
┅┅取50g试样与100mL甲醇-水（8：2）溶液混合；
┅┅加入2.5g氯化钠以均质器高速搅拌，提取1分钟；
┅┅4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤；
┅┅取10mL滤液并加入40mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤
┅┅取稀释后液体待测；
┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器；
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
┅┅用10.0mL 0.1%的吐温/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体；
┅┅洗脱过程见实验例1。
 
（三）食醋
┅┅取5g试样，加入1.0g氯化钠；
┅┅以pH7.0磷酸盐缓冲溶液稀释定容至25.0mL；
┅┅4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤；
┅┅取10mL滤液并加入10mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤
┅┅取稀释后液体待测。
┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器；
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
┅┅用10.0mL 0.1%的吐温/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体；
┅┅洗脱过程见实验例1。
 
【结果判定】
经免疫亲和柱净化后，收集到的甲醇洗脱液可直接使用荧光计或者HPLC检测，也可使用薄层色谱或者酶联免疫试剂盒进行检测。收集到的1mL洗脱液中的黄曲霉毒素含量相当于0.5g样品中黄曲霉毒素含量。
【注意事项】
┅┅黄曲霉毒素危害极大，应戴手套操作。
┅┅使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液最好用5%浓度的次氯酸钠溶液浸泡过夜。
┅┅不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
 
【贮藏条件及保存期】
贮藏条件：亲和柱2-8℃保存，不可冻存
保存期：该产品有效期为12个月。