抗氧化剂是指能防止或延缓食品氧化,提高食品的稳定性和延长贮存期的食品添加剂。抗氧化剂的正确使用不仅可以延长食品的贮存期、货架期,给生产者、消费者带来良好的经济效益,而且给消费者带来更好的食品安全。抗氧化剂按来源可分为人工合成抗氧化剂(如BHA、BHT、PG等)和天然抗氧化剂(如茶多酚、植酸等)。常用的抗氧化剂有茶多酚(TP)、生育酚、黄酮类、丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)等,某些抗氧化剂的不适当补充会诱发疾病和增加人的死亡几率。合成抗氧化剂(最常用的有BHA、BHT)毒副作用较大,对人体肝、脾、肺等均有不利影响。
本次应用参考GB 5009.32-2016 食品安全国家标准 食品中9种抗氧化剂的测定,使用HPSW-AOX专用柱进行测定。
抗氧化剂标准使用液(100μg/mL),临用前用乙腈配置。
食用植物油:称取2g,放入50mL具塞离心管中,加10ml乙腈,涡旋5min,5000转/分离心5分钟,取上清液带净化。
HPSW-AOX专用柱
HPSW-AOX(2000mg/12ml)
(1)活化:依次用5 mL甲醇,5ml乙腈活化;
(2)上样洗脱:取适量提取液(5ml)过柱,收集流出液,加10ml甲醇-乙腈(1+2)洗脱,收集洗脱液。40℃氮吹至近干,加乙腈定容至1ml,涡旋,过0.22μm有机滤膜,上机。
仪器:Waters UPLC
色谱柱:Morphling WD-C18(4.6mm×250mm,5μm)
检测器:PDA
检测波长:280nm
流速:1ml/min 进样体积:10μL 柱温:35℃
洗脱条件:
实验一:混6种抗氧化剂
添加水平浓度:50mg/kg(50μg/mL)
图1:标准溶液图1
图2:样品图1
添加水平浓度:50mg/kg(50μg/mL)
1、标准的第一法是9种混标溶液,实际情况是有可能色谱柱条件不能达到分离的要求,可以分成两组进行测定,以避免两个峰重合的现象。若是遇到阳性样品且峰无法分开的情况,需要更换能达到分离的要求的色谱柱。
2、氮吹步骤控制在40度左右,且最好不要吹干,或者快吹干时将氮吹管提出水浴,常温下慢慢吹干,水浴温度过高又氮吹吹干后定容对BHT回收影响较大,对TBHQ也会有一定影响。